Jg q6: самый безрамочный из «бюджетников»

Jg q6: самый безрамочный из «бюджетников» — Ferra.ru

alexxlab 24.06.1978 Leave a comment

Содержание

Как включить световой индикатор на LG Q6 — журнал LG MAGAZINE Россия

У смартфона Q6 от LG есть множество удобных для пользователя опций и фишек, о которых знают далеко не все владельцы. Например, многие специалисты отмечают в числе его преимуществ возможность редактирования на экранных кнопок. При том, что смартфон лежит в руке гораздо комфортнее, чем другие 5,7-дюймовые аналоги, эта функция может оказаться очень полезной и помогает настроить управление экраном для максимального удобства. Также в Q6 можно изменять размер наэкранной клавиатуры, настраивать режим экономии батареи, изменять форму и фон иконок и многое другое. Одной из полезных опций телефона LG Q6, о которой стоит упомянуть особо, является наличие светового индикатора на верхней части передней панели. Его можно настроить так, чтобы получать уведомления о вызовах, смс-сообщениях или сообщениях в мессенджерах и соцсетях на выключенном экране.

Более того, настроить световой индикатор можно таким образом, что на разные типы уведомлений он будет загораться разными цветами. Вы всегда будете в курсе того, какие именно уведомление вы сейчас получили, не прикасаясь к телефону и не включая экран. Также эта опция очень удобна, если ваш телефон LG Q6 находится на беззвучном режиме.

Как включить световой индикатор на смартфоне: пошаговая инструкция:

Для управления световым индикатором есть специальные приложения. Хорошо себя зарекомендовали Light Manager или Light Flow Light. Вам понадобится скачать любое из них и установить на свой смартфон. Оба приложения бесплатные, но с рекламой.
Зайдите в меню «Настройки». Выберите раздел «Мелодии и уведомления», а в нем пункт «Доступ к уведомениям» и выберите в списке скачанное вами приложение.
После этого вы сможете настроить Led-уведомления разных видов по цветам, например, пропущенные звонки, смс-сообщения, уведомления мессенджеров (What’s App, Telegram, Viber), уведомления социальных сетей (Facebook, Vkontakte), а также сервисные уведомления: низкий заряд батареи и т.д.

При помощи приложения Light Flow Light световой индикатор можно включить и настроить таким образом, чтобы он реагировал определенным цветом не только на виды уведомлений, но и на отдельных адресатов. Вот что для этого нужно сделать:

В навигационной панели приложения нажмите на «Настройки уведомлений». В выпавшем меню выберите пункт «+».
Вы увидите список из четырех опций настроек:

From an outstanding notification – уведомления от избранных групп в мессенджерах (нужно настроить дополнительно) или уведомления о сообщениях, содержащих запрограмированный текст.

From an installed application – уведомления от избранных программ.

From System Event – cервисные уведомления.

Contact specific

notifications – уведомления от избранных пользователем контактов.

Обзор смартфона LG Q6: недорогой и почти безрамочный

С появлением нового тренда, заданного еще практически никому неизвестным Sharp Aquos Crystal в 2014 году, каждая компания старается по максимуму избавиться от рамок вокруг экрана. Доказательством тому служат новейшие флагманы от грандов индустрии: Samsung Galaxy S8, Xiaomi Mi Mix 2 и, наконец, iPhone X. LG тоже пошла по этому пути, выпустив более полугода назад LG G6. Но сегодня речь пойдет не о дорогом смартфоне, а о вполне бюджетном аппарате.

Перед вами — LG Q6, один из первых недорогих “безрамочных” смартфонов. Кратко пройдемся по характеристикам и рассмотрим его в деталях.

Дисплей	IPS, 16 млн. цветов
Диагональ дисплея	5,5 дюйма
Разрешение дисплея	FHD+ (2160 x 1080), 442 ppi
Операционная система	Android 7.1.1
Процессор	Qualcomm Snapdragon 435
Видеоакселератор	Adreno 505
Объем оперативной памяти	32 Гб
Объем постоянной памяти	3 Гб
Слот для карты памяти	Есть, microSD, до 2 Тб, выделенный
Основная камера	13 Мп
Фронтальная камера	5 Мп, широкоформатная
Видеосъемка	FHD (1920×1080), HD+ (1440×720), HD (1280×720)
Количество SIM-карт	2, nano
Интерфейсы	WiFi 802.11 b/g/n, Bluetooth 4.2, GPS, microUSB 2.0, FM-радио, NFC
Сканер отпечатков пальцев	Отсутствует
Быстрая зарядка	Не поддерживается
Батарея	3000 мА*ч
Вес	149
Габариты	69x143x8.1
Цвета	Золотистый, черный, серебристый, белый

Устройство не блещет производительностью, зато укомплектовано FHD+ дисплеем, сносным количеством оперативной и постоянной памяти и, что может приглянуться многим, раздельными слотами для SIM-карт и microSD-карты. Кроме того, LG Q6 поддерживает NFC, а значит, и технологию беспроводной оплаты Android Pay, что тоже немаловажно.

Коробка и комплектация

Внутри коробки из черного картона нет ничего лишнего: сам смартфон, USB-кабель, зарядное устройство, скрепка для извлечения SIM-карт и инструкция. Столь куцый набор аксессуаров определяет цена устройства, поэтому претензий тут быть не может.

Дизайн

Корпус смартфона, как и рамка вокруг выполнены из металла. Края корпуса имеют плавное скругление. Несмотря на большую диагональ экрана (5,5 дюйма), LG Q6 прекрасно будет сидеть даже в женской руке благодаря измененному соотношению сторон и практически полному отсутствию рамок снизу и сверху дисплея.

Практически всю фронтальную поверхность занимает Full Vision дисплей. В небольшой полоске сверху примостились камера, датчик приближения, датчик света и разговорный динамик. К сожалению, отсутствует индикатор уведомлений. Нижнюю полоску занял едва заметный логотип LG.

С правого торца расположилась кнопка разблокировки, слева — кнопки управления громкостью и два слота для карты памяти и SIM-карт. В нижнем торце находится микрофон, джек для наушников и microUSB-разъем. Сверху и снизу также расположились антенные дорожки. Задняя панель аскетично оборудована камерой и вспышкой в верхней части и динамиком в нижней. К сожалению, в аппарат не встроили сканер отпечатков пальцев, что немного расстраивает. В связи с отсутствием места для него на фронтальной панели было бы логично расположить его сзади, но увы.

Дисплей

Мы подошли к тому, что так выделяет данный смартфон из череды его конкурентов — практически безрамочный FHD+ дисплей с соотношением сторон 18:9. Название FHD+ означает увеличенное по горизонтали разрешение до 2160 пикселей, по вертикали оно осталось прежним. IPS-дисплей отлично передает цвета, практически не слепнет на солнце и обладает прекрасной контрастностью. Он является большим достоинством данного аппарата. Придраться тут не к чему. Широкоэкранный дисплей LG Q6 отлично подходит для просмотра фильмов и серфинга в интернете.

ОС и пользовательский интерфейс

LG Q6 работает на базе Android 7.1.1. Интерфейс оболочки LG UI немного отличается от стоковой, что, впрочем, не доставляет особенных неудобств и привыкаешь к нему быстро. Если у вас был аппарат от LG, то проблем с поиском того или иного пункта меню у вас не возникнет.

Работает операционная система в рамках, которые ограничивает мощность железа: иногда смартфон “задумывается” на пару мгновений, а в приложении камеры обработка HDR-снимков занимает весьма значительное время. В остальном претензий к системе нет, все более-менее интуитивно понятно, ничего не глючит.

Если вы привыкли к огромному количеству программ на смартфоне, то вынуждены вас разочаровать: тормозить систему они будут нещадно. Смартфон больше подойдет людям, которым нужно небольшое количество приложений.

Процессор и память

Смартфон оборудован процессором из младшего семейства Qualcomm Snapdragon — Snapdragon 435. В паре с ним трудится видеоускоритель Adreno 505. Эта парочка уже зарекомендовала себя в массе бюджетных смартфонов. Разумеется, они не могут претендовать на сколь-либо серьезные результаты: в тестах они набирают весьма немного очков. Про ресурсоемкие 3D-игры стоит забыть.

Оперативной памяти в LG Q6 установлено 3 Гб, постоянной — 32 Гб. Это приемлемый минимум для современного смартфона. Для тех, кому не хватает постоянной памяти, предусмотрен слот для карты памяти microSD емкостью аж 2 Тб. Что самое приятное — слот отдельный.

Интерфейсы

Кроме стандартных WiFi, Bluetooth, GPS, джека для наушников и microUSB-разъема LG Q6 может похвастаться FM-радиомодулем и NFC. Последнее придется очень кстати сторонникам бесконтактной оплаты.

Батарея

Емкость аккумулятора смартфона составляет не самые емкие 3000 мА*ч. Впрочем, и плохим результатом назвать это нельзя, поскольку низкочастотный процессор не потребляет много энергии. В режиме среднего использования — полчаса разговоров, 2 часа включенного экрана — смартфона должно хватать на весь день использования. Батарея не поддерживает режим быстрой зарядки. Впрочем, он не особо нужен — с нулевого до полного заряда смартфон наберет энергии за полтора часа.

Связь и звук

Внешний динамик LG Q6 звучит вполне качественно и громко. Из кармана джинсов даже зимой его услышать не проблема. Вибрация средняя. В наушниках звук вполне неплох.

Аппарат поддерживает два основных диапазона LTE из трех: B7 и B20. Качество связи при звонке отличное.

Камеры

Разрешение основной камеры составляет 13 мегапикселей, что можно было бы назвать неплохим результатом, если бы качество снимков определялось одним разрешением. Увы, похвастаться хорошей картинкой аппарат не может. Только при очень хорошей освещенности аппарат способен выдать неплохой снимок. В условиях недостаточной освещенности, а тем более ночного освещения качество снимков не выдерживает никакой критики. В ряде случаев аппарат сильно уходит в желтый цвет. это касается работы как основной, так и фронтальной камеры. Особенно сильно эффект проявляется при фотографировании со вспышкой. В целом, фотографирует LG Q6 на уровне более бюджетных моделей.

Макро

Макро со вспышкой

Контр-съемка

Контр-съемка, HDR

Съемка на закате

Съемка на закате, HDR

Съемка на закате

Съемка на закате, HDR

Ночная съемка

Ночная съемка, HDR

На экране камеры доступны основные функции, но нет HDR — за переключателем нужно лезть в меню. По умолчанию он установлен в автоматическом режиме — камера сама определит, нужен ли применять алгоритм улучшения снимка в этой сцене или можно обойтись без него.

Стоит отметить, что в меню смартфона можно выбрать соотношение сторон как для съемки фото, так и для съемки видео (16:9 или 18:9). Для последнего доступно разрешение FHD, HD+ и HD. FHD+ не поддерживается.

Итоги

LG сделала противоречивый смартфон. Весьма неплохой набор фишек в виде отличного дисплея, занимающего фронтальную поверхность почти полностью, наличия NFC, неплохого дизайна и отдельным слотом для microSD-карты компенсируются не самым быстрым процессором и весьма слабой камерой. Если последние два пункта вас не пугают, то LG Q6 станет весьма интересной находкой.

LG Q6 — Процессор

Huawei MediaPad M3 Lite 8.0 Wi-Fi	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 435 MSM8940, Количество ядер: 8)
Motorola Moto G5	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)
Motorola Moto G5s	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)
Motorola Moto Green Pomelo	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)
Multilaser MS80	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)
Coolpad Note 3S	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 415 MSM8929, Количество ядер: 8)
Coolpad Note 6	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 435 MSM8940, Количество ядер: 8)
Huawei nova 2 Lite	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)
Huawei nova Lite+	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 435 MSM8940, Количество ядер: 8)
Huawei nova Smart	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 435 MSM8940, Количество ядер: 8)
Alcatel OneTouch Pop Up	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 610 MSM8936, Количество ядер: 8)
Kyocera Otegaru 01	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)
Palm Phone	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 435 MSM8940, Количество ядер: 8)
Alcatel Pop 4 (10)	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)
HiSense PureShot	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 415 MSM8929, Количество ядер: 8)
HiSense PureShot+	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 415 MSM8929, Количество ядер: 8)
LG Q6	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 435 MSM8940, Количество ядер: 8)
Kyocera Qua phone QZ	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)
Kyocera Qua tab QZ8	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)
Kyocera rafre KYV40	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)
Xiaomi Redmi 3S 16GB	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)
Xiaomi Redmi 3S 32GB	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)
Xiaomi Redmi 3S Plus	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)
Xiaomi Redmi 3X	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)
Xiaomi Redmi 4 SD435	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 435 MSM8940, Количество ядер: 8)
Xiaomi Redmi 4 Standard Edition	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)
Xiaomi Redmi 4X	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 435 MSM8940, Количество ядер: 8)
Xiaomi Redmi Note 5A High Edition	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 435 MSM8940, Количество ядер: 8)
Xiaomi Redmi Y1	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 435 MSM8940, Количество ядер: 8)
RugGear RG850	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)
Gionee S11 Lite	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)
Infinix S3X	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)
Kyocera S4	1400 МГц (Qualcomm Snapdragon 430 MSM8937, Количество ядер: 8)

Обзор смартфона LG Q6 “Дорогая, я уменьшил LG G6” — Обзоры на mobila shop

29 ноября 2017

LG Q6 — это среднебюджетный смартфон, являющийся прямым наследником флагмана 2017 года — LG G6. Визуально смартфон сильно похож на своего именитого предшественника. Он обладает тем же соотношением сторон 18:9, практически безрамочным дизайном и похвальной сборкой, благодаря которой смартфон прекрасно сидит в руке. Однако не все фишки флагмана перекочевали в героя нашего обзора. Всему виной цена.

Например, пластиковая крышка подвержена царапинам. Также вы не найдете в нем сканера отпечатков пальцев — аналогичным образом Motorola поступила с Moto E4. Предсказуемо производительности “железа” недостаточно для того, чтобы справиться с требовательными 3D-играми из Google Play Store.

Бюджетный сегмент рынка смартфонов в наши дни конкурентен как никогда, и слабые стороны LG Q6 сложно простить, но стоит заметить, что за свои деньги данным смартфон является неплохим выбором.

Дисплей

FullVision монитор и камера спасают этот смартфон. Q6 апеллирует к фанатам мультимедийных развлечений. Его 5,5-дюймовый FullVision дисплей сильно сжимает рамки и возносит соотношение площади экрана к площади фронтальной стороны смартфона на очень высокую планку. В отличие от большинства смартфонов, LG Q6 имеет соотношение сторон 18:9, и отсюда вытекает его странное разрешение — 2160×1080.

Это означает, что он его длина превышает ширину в два раза. И хотя это не сильно сказывается на повседневном пользовании смартфоном, дополнительная площадь экрана позволяет сильнее погрузиться в игру или фильм. Также, как и на LG G6.

Качество LCD-дисплея можно назвать хорошим: картинка достаточно детализированная, сочная и вполне контрастная, хотя иногда кажется, что цвета слишком блеклые и яркость могла бы быть и пониже.

Что касается камер, 13-мегапиксельная основная камера в правильных руках способна удивить — и, естественно, если условия освещения это позволяют. Приложение камеры быстро грузится с экрана блокировки. И хотя снимки не всегда радуют глаз, камеру можно назвать одной из лучших в своей категории.

В то время как большинство флагманов оперирует большим размером сенсора фронтальной камеры, в LG Q6 встроена стандартная 5-мегапиксельная матрица. Качество каждого снимка не поражает воображение, зато есть возможность переключения между обычным углом зрения и широким. Эта любопытная возможность характерна для смартфонов LG.

В дополнение к этому приложение камеры LG Q6 продолжает быть одним из лучших, если не самым лучшим. От фильтров до простого интерфейса и инновационного двойного захвата, который скрепляет две квадратные фотографии вместе — все это позволяет пользователю экспериментировать со своими фотографиями.

В целом, Q6 не заменит камеру вашего флагманского смартфона. Но если ваши ожидания не так высоки, смартфон вас удивит.

Батарея

LG Q6 идет в комплекте с батареей емкостью 3000 мА*ч, что для смартфона такого размера и цены вполне приемлемо. Как и большинства смартфонов, LG Q6 хватит на целый день использования. Однако, если вы адепт соцсетей, то в конце рабочего дня у вас останется 20% заряда.

Для большего понимания, как быстро расходуется батарея, приведем вам пример: 90-минутное видео опустошило батарею на 16%. Такой показатель позволяет прожить на остаток заряда целый день. Однако если вы без перерыва смотрите Youtube с перерывами на несколько раундов в Heartstone, утекать проценты заряда будут очень быстро. Впрочем, как и на любом другом девайсе.

С нуля до 25% смартфона способен зарядиться за полчаса. До 73% смартфон зарядится за час, а полная зарядка займет полтора часа. Удивительно, но LG Q6 способен прожить несколько дней в бездействии, при этом практически не теряя заряда. за три дня бездействия смартфон разрядился всего на 13%.

Камера

Как мы уже отметили выше, LG Q6 вполне конкурентен в плане качества снимков. При хорошем освещении они оправдывают ожидания. Это относится как к основной, так и к фронтальной камере. Да, есть проблемы при съемке при недостатке света. Также мы заметили свойство Q6 делать светлые участки фотографий слишком яркими. Это может осложнить фотографирование в солнечную и пасмурную погоду, которые обычно считаются наилучшими условиями для фотографирования.

Мы сделали как отличные, так и ужасные снимки на Q6. Учитывая его статус среднебюджетника, мы рады тому, что первых получается гораздо больше, чем последних. На снимках ниже можно увидеть образцы фотографий. Честно говоря, мы не ожидали таких результатов. При правильном освещении камера снимает хорошо.

При съемке видео сенсор иногда испытывает трудности при поиске фокуса. Конечно, в кадре бывает много деталей, но это точно не лучший выбор для съемки хорошего видео. К тому же опция SteadyRecord, которая использует электронную оптическую стабилизацию, на самом деле создает более трясущуюся картинку, а не помогает избавиться от нее.

Что-то еще?

На первый взгляд Q6 выглядит абсолютно таким же, как G6. Как мы уже упоминали, это два очень разных аппарата. К этому стоит добавить еще то, что, хоть Q6 и сильно дешевле, он не обладает 2K-разрешением, которым может похвастаться старший брат. Вдобавок LG Q6 обладает пластиковым задником, который менее устойчив к царапинам. Одно неаккуратное падение на кафельный пол — и у него образуется огромное количество невыводимых царапин.

Также этот смартфон не может похвастаться водозащищенностью. Он не обладает функцией беспроводной зарядки. Он не может похвастаться защитой стекла и сборкой уровня MIL-STD 810G, которая позволяет смартфону использоваться в вооруженных силах (а это дорогого стоит).

Впрочем, все эти аспекты не играют против Q6, однако важно различать эти устройства, учитывая их внешнюю похожесть.

Так для кого он и нужно ли мне его покупать?

LG Q6 создан для людей, который могут себе позволить смартфон среднего ценового сегмента, но не склонны выкладывать большие деньги за флагманский смартфон. Как ни посмотри, герой нашего обзора очень сильно напоминает LG G6 — флагман корейской компании. Но не ошибитесь: внутри этот смартфон сильной отличается и больше похож на Moto G5. Он не станет для вас изумительным открытием.

Неофициально названный “LG G6 mini”, LG Q6 — это впечатляющий смартфон сам по себе. В нем отсутствует большинство флагманских фишек и, что очень раздражает, сканер отпечатков пальцев, однако FullVision-дисплей может стать решающим факторов в выборе смартфона. Есть две причины, которые могут побудить вас к покупке LG Q6: соотношение сторон и камеры. Смартфон великолепно масштабирует большинство приложений и служит прекрасным аппаратом для просмотра видео. Его камеры, хоть иногда и смазывающие снимок в самый неподходящий момент, способны выдать действительно хороший результат.

Если причины, описанные выше, играют большую роль в вашей повседневной деятельности, LG Q6 вам понравится. Однако если вы надеетесь на то, что смартфон, который стоит в два раза дешевле, будет выполнять функции флагмана, вас постигнет сильное разочарование.

Поделитесь с друзьями:

Samson Q6 3 Pack динамических микрофонов

Магазин будет работать некорректно, если куки отключены.

Похоже, в вашем браузере отключен JavaScript. Для наилучшей работы с нашим сайтом обязательно включите Javascript в своем браузере.

Home
Samson Q6 3 Pack Dynamic Microphones

Три динамических микрофона суперкардиода, представленные в удобной упаковке, включая футляр и зажимы.

Компания Samson Technologies начала в 1980 году разработку систем беспроводных микрофонов.
Сегодня они являются лидером в области производства потребительского и профессионального аудио.
представлены тремя известными брендами: Samson Audio, Samson Wireless и Hartke.
Более 250 продуктов продаются и распространяются в более чем 140 странах мира.

В 1980 году Samson представила свою первую беспроводную микрофонную систему.
За годы своего существования Samson стал лидером в области беспроводной связи.
В начале 90-х они начали расширять сферу охвата нашей аудиопродукции
за счет разработки усилителей мощности, микшеров, проводных микрофонов и процессоров сигналов.
В 2005 году Samson представила первые профессиональные USB-микрофоны, которые будут использоваться музыкантами,
вещательными компаниями и энтузиастами подкастов. USB-микрофоны Samson теперь являются отраслевым стандартом.

Этот действительно доступный по цене пакет содержит динамические микрофоны с суперкардиодом X3. Идеально подходит как для вокала, так и для инструментов, на сцене или в студии.и чехол для переноски.

Дополнительная информация
Торговая марка	Samson
Код продукта	SAQ6CL3P

Характеристики:

Три динамических микрофона Q6 для профессиональных концертных и студийных работ.
Неодимовый динамический микрофонный элемент для широкого динамического диапазона.
Конструкция с высоким выходом и низким сопротивлением.
Суперкардиоидная диаграмма направленности с отличным отклонением вне оси.
Плавная частотная характеристика от 50 Гц до 15 кГц.
Поддерживает высокий уровень звукового давления до 134 дБ для близких микрофонных ситуаций.
Многоосевой амортизирующий капсюль сводит к минимуму шум при работе.
Переключатель включения / выключения для управления на сцене.
Позолоченный разъем XLR.
Прочный литой под давлением корпус, решетка из закаленной стали.
Включает три зажима для микрофона и жесткий чехол с поролоновой подкладкой.

Продукты, обозначенные выше как «В наличии», можно заказать с доставкой или Click & Collect.

Если вы предпочитаете посетить наши магазины в Ньюкасле или Метроцентре, пожалуйста, свяжитесь с нами, чтобы проверить наличие, так как с таким широким ассортиментом мы не можем выставить все товары в наших магазинах.

Если вы хотите задать вопросы об этом продукте, свяжитесь с нами для получения помощи.

Генетика и экспрессия генов Q6 и Q8. LTR-подобная последовательность в 3′-нетранслируемой области

Allen, H., Fraser, J., Flyer, D., Calvin, S., and Flavell, R .: β ₂ — Микроглобулин не требуется для экспрессии на клеточной поверхности мышиного антигена гистосовместимости класса I H-2D ^b или усеченного H-2D ^b. Proc Natl Acad Sci USA 83: 7447–7451, 1986

Google ученый

Блин, Н. и Страффорд, Д. У .: Общий метод выделения высокомолекулярной ДНК из эукариот. Nucleic Acids Res 3: 2302–2308, 1976

Google ученый

Брюлет П., Кагад М., Сюй Ю., Круассан О. и Джейкоб Ф .: Ранняя дифференциальная тканевая экспрессия транспозоноподобных повторяющихся последовательностей ДНК мыши. Proc Natl Acad Sci USA 80: 5641–5645, 1983

Google ученый

Косман Д., Кресс М., Хури Г. и Джей Дж .: Тканевая экспрессия необычного гена, родственного H-2 (класс I). Proc Natl Acad Sci USA 79: 4947–4951, 1982

Google ученый

Девлин, Дж. Дж., Вайс, Э. Х., Полсон, М. и Флавелл, Р. А .: Дублированные пары генов и аллели генов класса I в области Qa2 главного комплекса гистосовместимости мышей: сравнение. EMBO J 4: 3203–3207, 1985

Google ученый

Истман О’Нил, А., Рид, К., Гарбери, Дж. С., Карл, М. и Флаэрти, Л .: Обширные делеции в области Q главного комплекса гистосовместимости мыши. Immunogenetics 24: 368–373, 1986

Google ученый

Эллиотт, Э., Карл, М. и Флаэрти, Л.: Новые виды мРНК из гена класса I в субрегионе Q главного комплекса гистосовместимости мыши. Ген 61: 189–198, 1987

Google ученый

Фарнер, К., Хоган Б. Л. и Флавелл Р. А. Транскрипция генов H-2 и Qa у эмбриональных и взрослых мышей. EMBO J 6: 1265–1271, 1987

Google ученый

Файнберг, А. П. и Фогельштейн, Б .: Методика радиоактивного мечения фрагментов рестрикционных эндонуклеаз ДНК с высокой специфической активностью. Anal Biochem 132: 6–13, 1983

Google ученый

Флаэрти, Л.: Tla-регион antigbns. In M. Dorf (ed.): The Role of the Major Histocompatibility Complex in Immunobiology , pp. 33–57, Garland Press, New York, 1981

Google ученый

Флаэрти, Л., Циммерман, Д. и Салливан, К. А .: Антигены Qa-2 и Qa-3 в субпопуляциях лимфоцитов. J Immunol 121: 1640–1643, 1978

Google ученый

Флаэрти, И.., DiBiase, K., Lynes, M., Seidman, J.G., Weinberger, O., и Rinchik, E.M .: Характеристика гена субрегиона Q в главном комплексе гистосовместимости мышей. Proc Natl Acad Sci USA 82: 1503–1507, 1985

Google ученый

Исфорт, Р. Дж. И Иле, Дж. Н .: Метод анализа последовательностей 4-6-8. BioTechniques 6: 138–141, 1988

Google ученый

Кахад, М., Maillet, L. и Brulet P .: Ретровирусные характеристики длинного концевого повтора морских последовательностей E.Tn. EMBO J 4: 2911–2915, 1985

Google ученый

Лью, А. М., Малой, В. Л. и Колиган, Дж. Э .: Характеристики экспрессии растворимой молекулы класса I мыши (Q10). J Immunol 136: 254–258, 1986a

Google ученый

Лью, А.М., Лиллехой, Э. П., Коуэн, Э. П., Малой, В. Л., Ван Шравендейк, М. Р. и Колиган, Дж. Э .: Гены и молекулы класса I: обновленная информация. Иммунология 57: 3–18, 1986b

Google ученый

Манн Д. и Форман Дж .: Распознавание цитотоксическими Т-лимфоцитами антигенов Qa-2. Чувствительность молекул Qa-2 к фосфатидилинозитол-специфической фосфолипазе C. J Immunol 141: 1813–1818, 1988

Google ученый

Меллор, А.Л., Антониу Дж. И Робинсон П. Дж .: Структура и экспрессия генов, кодирующих мышиные антигены Qa-2 класса I. Proc Natl Acad Sci USA 82: 5920–5924, 1985

Google ученый

Мелтон, Д.А., Крейг, Пенсильвания, Ребаглиати, М.Р., Маниатис, Т., Зинн, К., и Грин, М.Р .: Эффективный синтез in vitro биологически активных РНК- и гибридизационных зондов РНК из плазмид, содержащих промотор бактериофага SP6 . Nucleic Acids Res 12: 7035–7070, 1984

Google ученый

Майклсон, Дж., Флаэрти, Л., Бушкин, Ю. и Юдковиц, Х .: Дополнительные биохимические данные по Qa-2. Immunogenetics 14: 129–140, 1981

Google ученый

Майерс, Р. М., Ларин, З. и Маниатис, Т.: Обнаружение замен одного основания с помощью расщепления рибонуклеазой при несовпадении в дуплексах РНК: ДНК. Наука 230: 1242–1246, 1985

Google ученый

Палмер, М.Дж. И Фрелингер, Дж. А .: Широко распространенная транскрипция гена области Qa у взрослых мышей. J Exp Med 166: 95–108, 1987

Google ученый

Пампено, С. и Меруэло, Д.: Выделение ретровирусоподобной последовательности из локуса TL главного комплекса биосовместимости мышей C57BL / 10. J Virol 58: 296–306, 1986

Google ученый

Робинсон, П.Дж .: Qb-1, новый полипептид класса I, кодируемый областью Qa мышиного комплекса H-2 . Immunogenetics 22: 285–289, 1985

Google ученый

Робинсон П. Дж .: Два различных биосинтетических пути секреции антигенов класса I, ассоциированных с областью Qa , лимфоцитами мыши. Proc Natl Acad Sci USA 84: 527–531, 1987

Google ученый

Зангер, Ф., Никлен, С. и Коулсон, A.R .: Секвенирование ДНК с помощью ингибиторов обрыва цепи. Proc Natl Acad Sci USA 74: 5463–5467, 1977

Google ученый

Schepart, BS, Woodward, JG, Palmer, MJ, Macchi, MJ, Basta, P., McLaughlin-Taylor, E., and Frelinger, JA: Экспрессия в L-клетках трансфицированных генов класса I от основной мыши комплекс гистосовместимости. Proc Natl Acad Sci USA 82: 5505–5509, 1985

Google ученый

Шелл, Б., Szurek, P., и Dunnick, W.: Прерывание двух областей переключения тяжелой цепи иммуноглобулина в плазматической плазме мыши P3.26Bu4 путем вставки ретровирусоподобного элемента ETn. Mol Cell Biol 7: 1364–1370, 1987

Google ученый

Солоски, М. Дж., Верначио, Дж., Эйнхорн, Г. и Латтимор, А .: Экспрессия гена Qa : биосинтез и секреция молекул Qa-2 в активированных Т-клетках. Proc Natl Acad Sci USA 83: 2949–2953, 1986

Google ученый

Солоски, м.J., Hood, L. и Stroynowski, I.: Qa — экспрессия гена класса I: идентификация второго гена класса I, Q9 , кодирующего полипептид Qa-2. Proc Natl Acad Sci USA 85: 3100–3104, 1988

Google ученый

Stiernberg, J., Low, MG, Flaherty, L., and Kincade, PW: Удаление поверхностных молекул лимфоцитов с помощью фосфатидилинозитол-специфической фосфолипазы C: влияние на митогенные реакции и доказательство того, что ThB и некоторые Qa-антигены являются мембранными антигенами. закреплен через фосфатидилинозитол. J Immunol 38: 3877–3884, 1987

Google ученый

Стройновски И., Солоски Дж., Лоу, М.Г. и Худ, Л.: Один ген кодирует растворимые и мембраносвязанные формы основного антигена гистосовместимости Qa-2: закрепление продукта фосфолипидом. хвост. Ячейка 50: 759–768, 1987

Google ученый

Tewarson, S., Zaleska-Rutczynska, Z., Фигероа, Ф. и Кляйн, Дж .: Полиморфизм локусов Qa и Tin мыши. Тканевые антигены 22: 204–212, 1983

Google ученый

Уорнер, К. М .: Генетические манипуляции с главным комплексом гистосовместимости. J Anim Sci 63: 279–287, 1986

Google ученый

Уорнер К. М., Голлник С. О. и Голдбард С. Б. Связывание гена доимплантационного эмбрионального развития ( Ped ) с основным комплексом гистосовместимости мыши (MHC). Biol Reprod 36: 606–610, 1987a

Google ученый

Warner, CM, Gollnick, SO, Flaherty, L., and Goldbard, SB: Анализ экспрессии антигена Qa-2 на преимплантационных эмбрионах мыши: возможная связь с продуктом гена доимплантационного эмбрионального развития ( Ped ) . Biol Reprod 36: 611–616, 1987b

Google ученый

Вайс, Э.Х., Голден, Л., Фарнер, К., Меллор, А.Л., Девлин, Дж. Дж., Буллман, Х., Тидденс, Х., Бад, Х., и Флавелл, Р.А.: Организация и эволюция семейства генов класса I. в основном комплексе гистосовместимости мыши C57BL / 10. Nature 310: 650–655, 1984

Google ученый

Widacki, S. and Cook, R .: NH _{2 Анализ} -концевой аминокислотной последовательности аллоантигенов Qa-2. Immunogenetics 29: 206–209, 1989

Google ученый

Sillas clásicas | ПРИМЕРА АВЕНИДА

Mostrando 1–60 из 109 результатов

29181 Силла классического дизайна BERNEY tapizado gris con tachuelas y patas de madera
310,00 €
NO DISPONIBLE EN ESTE MOMENTO.Este producto no está ahora mismo en stock pero se recibirá más adelante. Puedes contactarnos y te informaremos de la fecha prevista de llegada.
Añadir al carrito
29556 Silla de Disño vintage SPOCCIA tapizada terciopelo ocre, ratán y madera, цвет негритянский
440,00 €
NO DISPONIBLE EN ESTE MOMENTO. Este producto no está ahora mismo en stock pero se recibirá más adelante. Puedes contactarnos y te informaremos de la fecha prevista de llegada.
Añadir al carrito
30118 Silla de disño vintage VELBURG madera de caucho negro y ratán natural
496,00 €
NO DISPONIBLE EN ESTE MOMENTO. Este producto no está ahora mismo en stock pero se recibirá más adelante. Puedes contactarnos y te informaremos de la fecha prevista de llegada.
Añadir al carrito
29546 Силла классического дизайна RESIGA tapizado terciopelo ocre con anilla y tachuelas doradas
316,00 €
NO DISPONIBLE EN ESTE MOMENTO.Este producto no está ahora mismo en stock pero se recibirá más adelante. Puedes contactarnos y te informaremos de la fecha prevista de llegada.
Añadir al carrito
29545 Силла классического дизайна ISELLA tapizado terciopelo azul marino capitoné con tachuelas doradas
356,00 €
NO DISPONIBLE EN ESTE MOMENTO. Este producto no está ahora mismo en stock pero se recibirá más adelante. Puedes contactarnos y te informaremos de la fecha prevista de llegada.
Añadir al carrito
29543 Силла классического дизайна PLAUE tapizado terciopelo negro con anilla y tachuelas doradas
316,00 €
NO DISPONIBLE EN ESTE MOMENTO. Este producto no está ahora mismo en stock pero se recibirá más adelante. Puedes contactarnos y te informaremos de la fecha prevista de llegada.
Añadir al carrito
34Ih3008G Силла с репозиториями для дизайна Art Decó tapizada gris y mostaza con patas madera y metal negro mate
290,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
34Ih3008V Silla con reposabrazos de disño Art Decó tapizada terciopelo verde ocre y beige con patas madera y metal negro mate
290,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
29773 Силла классического дизайна BAENA tapizado lino color crema
499,00 €
NO DISPONIBLE EN ESTE MOMENTO.Este producto no está ahora mismo en stock pero se recibirá más adelante. Puedes contactarnos y te informaremos de la fecha prevista de llegada.
Añadir al carrito
29775 Silla de disño vintage SASSA patas de madera y tapizado color ocre
398,00 €
NO DISPONIBLE EN ESTE MOMENTO. Este producto no está ahora mismo en stock pero se recibirá más adelante. Puedes contactarnos y te informaremos de la fecha prevista de llegada.
Añadir al carrito
29776 Силла классического дизайна ERSA patas de madera y tapizado capitoné color turquesa
398,00 €
NO DISPONIBLE EN ESTE MOMENTO. Este producto no está ahora mismo en stock pero se recibirá más adelante. Puedes contactarnos y te informaremos de la fecha prevista de llegada.
Añadir al carrito
29779 Классический стиль MOLINELLA madera y tapizado capitoné verde
398,00 €
NO DISPONIBLE EN ESTE MOMENTO.Este producto no está ahora mismo en stock pero se recibirá más adelante. Puedes contactarnos y te informaremos de la fecha prevista de llegada.
Añadir al carrito
602661 Силла классического дизайна Мадера акабадо натуральный и таписадо тела негро
215,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
602660 Силла-де-классический классический мадера акабадо натуральный и таписадо тела грис
215,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
602659 Силла классического дизайна Мадера акабадо натуральный и таписадо тела азул
215,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
602658 Силла-де-классический мадера акабадо натуральный и таписадо тела сальмон
215,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
602657 Silla deiseño clásico madera acabado natural y tapizado tela beige
215,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
SE-220-UH-NAT Силла классического дизайна Мадера де Робле натуральный и таписадо лино
195,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
Silla ALBA de Desño Clásico Madera de haya y tapizada en Diferentes telas
238,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
601945 Силла классического дизайна таписадо, цвет большая часть с капитоне
120,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
601944 Silla de Disño Clásico Tapizado, цвет Verde Con Capitoné
120,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
601942 Силла классического дизайна таписадо, цвет gris con capitoné
120,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
601941 Классический стиль таписадо, цвет marrón con capitoné
120,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
34Ih3008F Силла-де-дизайн Art Decó tapizada, цвет бежевый, con patas madera y metal plata
270,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
602265 Силла-де-Классико-де-Ратан природный конкохин
165,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
723201 Sillón deisño vintage TETUAN de madera de teca y piel trenzada
232,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
914003 Silla de Disño vintage BRISBANE poliuretano blanco y terciopelo gris
275,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
600071 Силла-де-классический медальон símil piel marrón y madera de abedul
205,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
600070 Силла-де-классический медальон тела негро и мадера де абедул
199,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
600069 Силла-де-классический медальон Тела Гри и Мадера де Абедул
199,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
600068 Классический медальон Силла де Дисеньо Тела Асуль и Мадера де Абедул
199,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
600067 Классический медальон Силла де Сальмон и Мадера де Абедул
199,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
600066 Классический медальон Силла Бежевый и Мадера де Абедул
199,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
800049 Силла классического дизайна таписадо лино капитоне гри тахуэлас и анилла детрас
263,00 €
NO DISPONIBLE EN ESTE MOMENTO.Este producto no está ahora mismo en stock pero se recibirá más adelante. Puedes contactarnos y te informaremos de la fecha prevista de llegada.
Añadir al carrito
27231 Силла классического дизайна BERNEY tapizado ocre con tachuelas y patas de madera
310,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
27128 Классический стиль STENDAL madera y tapizado verde capitoné
344,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
Ch2512-NOGAL Silla tapizada de disño en madera y polipel
410,00 €
NO DISPONIBLE EN ESTE MOMENTO.Este producto no está ahora mismo en stock pero se recibirá más adelante. Puedes contactarnos y te informaremos de la fecha prevista de llegada.
Añadir al carrito
Ch27019 Silla tapizada de disño en madera y polipiel
399,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
27232 Силла классического дизайна BERNEY tapizado azul con tachuelas y patas de madera
296,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
940980-NAT Силла классического дизайна, лино и тачуэлы
295,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
24450S Классический стиль NEW WHITE 100 madera y rattán hecha a mano
158,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
143111S Silla tapizada de estilo clásico NEW WHITE 110 madera hecha a mano
202,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
309111 Silla de estilo clásico 80 en madera hecha a mano
153,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
303033 Silla con reposabrazos tapizada de estilo clásico MERAPI 106 en madera hecha a mano
261,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
302028 Silla tapizada de estilo clásico MERAPI 105 en madera hecha a mano
214,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
302004 Silla de Estilo Colony MERAPI 100 en madera hecha a mano
148,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
306019 Классический классический стиль INDUSTRIAL 100 en madera mindi hecha a mano
156,60 €
Hay existencias
Añadir al carrito
301562 Стиль колониального стиля FLASH 98 en madera mindi hecha a mano
135,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
148115 Silla de estilo Colonial FLAMINGO 98 en caoba hecha a mano
135,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
143034 Silla orejera tapizada de estilo colony FLAMINGO 105 en caoba hecha a mano
212,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
14033 Silla ESCALERA de estilo Colonial FLAMINGO 90 en caoba hecha a mano
148,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
140327 Silla de estilo Colonial FLAMINGO 110 en caoba hecha a mano
153,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
305010 Стиль колониального стиля BROMO 105 en madera mindi hecha a mano
205,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
303034 Silla con tapizada reposabrazos de estilo colialial BROMO 105 en madera mindi hecha a mano
250,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
800013 Бутака классического дизайна Винтаж Мадера и терчиопело Маррон
439,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
800012 Бутака классического дизайна, винтаж Madera y Terciopelo, роза капитоне
439,00 €
NO DISPONIBLE EN ESTE MOMENTO.Este producto no está ahora mismo en stock pero se recibirá más adelante. Puedes contactarnos y te informaremos de la fecha prevista de llegada.
Añadir al carrito
8659020 Silla estilo THONET giratoria STAR madera y rattán
173,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
25443 Silla DOLLOT deiseño clásico madera y lino beige
309,00 €
NO DISPONIBLE EN ESTE MOMENTO.Este producto no está ahora mismo en stock pero se recibirá más adelante. Puedes contactarnos y te informaremos de la fecha prevista de llegada.
Añadir al carrito
105123 Silla deiseño clásico capitoné color crema con reposabrazos
299,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito
105122 Silla deiseño clásico capitoné crema, tachuelas y adorno anilla
225,00 €
Hay existencias
Añadir al carrito

Q6, новый препарат, нацеленный на гипоксию, регулирует передачу сигналов фактора, индуцируемого гипоксией, с помощью механизма, зависимого от аутофагии, при гепатоцеллюлярной карциноме.

Abstract

Гипоксия опухоли лежит в основе неэффективности лечения и приводит к более агрессивным и метастатическим фенотипам рака.Хотя терапевтическое воздействие на эти гипоксические среды предлагалось в течение многих лет, на сегодняшний день ни один подход не показал терапевтическую ценность, чтобы получить одобрение регулирующих органов. Здесь мы продемонстрировали, что новое пролекарство, активируемое гипоксией, Q6, проявляет сильную антипролиферативную эффективность в условиях гипоксии и индуцирует каспазозависимый апоптоз в 2 клеточных линиях гепатоцеллюлярной карциномы (ГЦК), при этом явная токсичность не обнаруживается в 2 нормальных клеточных линиях печени. Обработка Q6 заметно подавляла экспрессию HIF1A [индуцируемый гипоксией фактор 1, субъединица α (фактор транскрипции основная спираль-петля-спираль)] и транскрипцию нижележащего гена-мишени, VEGFA (фактор роста эндотелия сосудов А).Этот двойной механизм модуляции, нацеленный на гипоксию, приводит к высокой эффективности в подавлении роста опухоли и васкуляризации в 2 моделях in vivo. Интересно, что именно зависимый от аутофагии путь деградации играет решающую роль в Q6-индуцированном ослаблении экспрессии HIF1A, а не протеасомозависимый путь, который обычно рассматривается как преобладающий механизм, лежащий в основе посттрансляционной регуляции HIF1A. Подавление аутофагии либо короткой интерферирующей РНК (миРНК), либо химическими ингибиторами блокировало индуцированную Q6 деградацию HIF1A.Аутофагическая деградация HIF1A была дополнительно подтверждена наблюдением, что HIF1A коиммунопреципитируется с убиквитин-связывающим адаптерным белком, SQSTM1, который разрушается посредством аутофагии. Кроме того, молчание SQSTM1 ингибировало Q6-индуцированную деградацию HIF1A. Эти данные свидетельствуют о том, что новый агент, нацеленный на гипоксию, Q6, имеет потенциальную клиническую ценность в терапии ГЦК. Более того, идентификация аутофагии как важнейшего регулятора HIF1A позволяет по-новому взглянуть на лечение, связанное с гипоксией.

Ключевые слова: пролекарство, активируемое гипоксией, механизмы двойной модуляции, посттрансляционная регуляция, аутофагия, нацеленное лечение

Введение

Многие солидные опухоли, особенно гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК), характеризуются областями гиповаскулярности, что определяется диагностической визуализацией. . Прямые измерения кислорода внутри опухоли с использованием зондов с поляграфическими электродами также подтвердили, что опухоли печени значительно более гипоксичны, чем прилегающие нормальные ткани.¹ ^– ³ При раке печени степень гипоксии опухоли, по-видимому, обратно коррелирует с прогнозом пациента и часто связана с устойчивостью к традиционным методам лечения. ⁴ ^– ⁶ Таким образом, он также представляет уникальную возможность для целенаправленного лечения, тем самым уменьшая побочные эффекты лекарств и повышая противоопухолевую эффективность.

Пролекарства, активируемые гипоксией (HAP), представляют собой новый класс лекарств, которые действуют посредством механизма, включающего избирательную активацию нетоксичного пролекарства в гипоксических областях опухолей.Первый многообещающий препарат, тирапазамин (TPZ), был значительным шагом вперед по сравнению с предыдущими, и исследования комбинации с фракционированным излучением продемонстрировали его способность убивать гипоксические клетки на моделях трансплантированных опухолей. Однако эта терапия работает только у некоторой части пациентов и не является лечебной, что свидетельствует о срочности выявления новых соединений. ⁷ ^, ⁸ Многие отчеты показали, что главный недостаток HAP-терапии для лечения гипоксии связан с гетерогенностью генетических аномалий, приобретенных в ходе канцерогенеза и изменений микросреды.⁹ Следовательно, использование уникального молекулярного фенотипа гипоксических клеток представляет собой жизнеспособную стратегию дополнения терапии HAP для улучшения результатов лечения пациентов.

Основные кислородно-чувствительные сигнальные пути, которые опосредуют адаптацию к гипоксии, сосредоточены на индуцируемом гипоксией факторе (HIF1), HIF1 представляет собой гетеродимерный белок, состоящий из субъединиц HIF1A и ARNT / HIF1B. В то время как ARNT экспрессируется конститутивно, экспрессия HIF1A увеличивается экспоненциально по мере снижения концентрации O ₂.Чтобы быстро реагировать на гипоксию, клетки тратят значительную энергию на непрерывный синтез и деградацию HIF1A в негипоксических условиях. В условиях гипоксии деградация HIF1A ингибируется, что приводит к накоплению белка, димеризации с ARNT, связыванию с элементами ответа на гипоксию (HRE) в генах-мишенях и, таким образом, модулирует более 100 генов-мишеней (например, VEGFA ), участвующих в ангиогенезе, выживаемости клеток, метаболизме глюкозы и устойчивости к традиционным методам лечения.¹⁰ ^– ¹² Таким образом, HIF1A был идентифицирован как привлекательная лекарственная мишень, и был предложен широкий спектр фармакологических подходов для модулирования его активности, в частности, за счет снижения уровня его белка. ⁷ ^, ⁸ ^, ¹³ Растущее число агентов, которые могут ингибировать активность HIF1A, показали значительную активность в остановке роста ксенотрансплантата опухоли. ¹⁴ ^, ¹⁵ Соответственно, мы предположили, что терапевтическая стратегия, направленная как на специфическое уничтожение гипоксических клеток, так и на ингибирование экспрессии HIF1A, может обеспечить повышенную противоопухолевую активность и клиническую пользу.

В наших лабораториях синтезирована серия 3-арилхиноксалин-2-карбонитрил 1,4-ди-N-оксидных аналогов TPZ, ¹⁶, некоторые из которых не только проявляли антипролиферативную активность и селективность к гипоксии в отношении нескольких клеточных линий, но также проявляли активность в ингибировании экспрессии HIF1A и связанной с ней передачи сигнала. Среди этих соединений Q6 отличался значительной противоопухолевой активностью как in vitro, так и in vivo. Что еще более важно, мы продемонстрировали, что Q6-индуцированное снижение экспрессии HIF1A было приписано, по крайней мере частично, деградации, опосредованной аутофагией, тогда как классический путь убиквитин-протеасома не участвовал.Таким образом, эти данные убедительно подтверждают идею о том, что благодаря нацеливанию на гипоксические клетки и двойным механизмам действия Q6 будет полезен в развитии новых типов HAP и новой роли аутофагии в посттрансляционной регуляции HIF1A также был раскрыт.

Результаты

Q6 проявляет сильную противоопухолевую активность и селективность к гипоксии в 2 линиях клеток HCC.

Как многообещающий HAP, Q6 (рис. S1) продемонстрировал широкую противоопухолевую активность и селективность к гипоксии в различных линиях раковых клеток.¹⁶ Таким образом, в текущем исследовании мы предположили, что Q6 может ингибировать выживание клеток HCC, особенно в условиях гипоксии. Чтобы ответить на этот вопрос, клетки HepG2 и Bel-7402 подвергали воздействию Q6 / TPZ в течение 72 часов в условиях нормоксии и гипоксии, а жизнеспособность клеток определяли с помощью анализа МТТ. Как и ожидалось, выживаемость клеток, подвергшихся воздействию Q6, в условиях гипоксии была намного ниже, чем у клеток в условиях нормоксии, со средними значениями IC ₅₀ 1,99 ± 0,25 мкМ в условиях гипоксии и 13.90 ± 5,15 мкМ в нормоксии, 7-кратная селективность (). Кроме того, мы сравнили антипролиферативные эффекты Q6 и TPZ в клетках HepG2 и Bel-7402 в условиях гипоксии. Результаты показали, что Q6 оказался более мощным, чем TPZ со значениями IC ₅₀ 2,24 ± 0,18 и 1,74 ± 0,32 мкМ, соответственно, по сравнению с соответствующими значениями 24,92 ± 6,79 и 6,55 ± 1,78 мкМ для TPZ (). По сравнению со злокачественными клетками две линии нормальных клеток печени человека, HL-7702 и клетки печени Chang, были устойчивы к обоим соединениям (рис.S2).

Рисунок 1. Q6 обладает сильной противоопухолевой эффективностью и запускает каспазозависимый апоптоз в 2 линиях клеток HCC. ( A и B ) Две линии клеток HCC, HepG2 (слева) и Bel-7402 (справа), обрабатывали Q6 или TPZ (от 0 до 12,5 мкМ) в течение 72 часов в условиях нормоксии или гипоксии. Жизнеспособность клеток определяли с помощью МТТ-анализа. Данные представляют 3 независимых эксперимента и выражены как среднее ± стандартное отклонение ( C и D ). Клетки HepG2 и Bel-7402 обрабатывали Q6 или TPZ (0, 10 мкМ) или Q6 (от 0 до 10 мкМ) + Z -VAD-FMK (40 мкМ) в течение 24 ч при нормоксии или гипоксии.( C ) Процент апоптоза измеряли проточной цитометрией с использованием набора для обнаружения апоптоза ANXA5 / PI. Было проведено три независимых эксперимента, и значения были выражены как среднее ± стандартное отклонение ( D ). Уровни белка PARP1 определялись вестерн-блоттингом. ACTB измеряли в качестве контроля нагрузки. Данные представляют 3 независимых эксперимента.

Q6 запускает каспазозависимый апоптоз

Повышенный апоптоз является важным механизмом, с помощью которого HAP убивают опухолевые клетки при гипоксии.Соответственно, для исследования влияния Q6 на апоптоз были использованы 3 различных подхода, а также был использован анализ исключения трипанового синего, чтобы исследовать, является ли апоптоз основной причиной гибели клеток, индуцированной Q6. Первоначально анализ апоптоза ANXA5 / аннексина V использовали для определения уровней апоптоза. После обработки Q6 или TPZ (0, 10 мкМ) в течение 24 часов мы обнаружили, что Q6 индуцировал 28,14% апоптоза в клетках HepG2 и 31,71% в клетках Bel-7402 в условиях гипоксии, что более вероятно, чем индуцированный TPZ ().Более того, в большинстве случаев процесс апоптоза сопровождался активацией каспазного каскада. Таким образом, мы обнаружили экспрессию некоторых белков, связанных с каспазой, таких как PARP1, CASP3 и расщепленный CASP3, методом вестерн-блоттинга после обработки Q6. Мы обнаружили, что Q6 индуцировал расщепление PARP1 и CASP3 в зависимости от концентрации и времени в 2 клеточных линиях HCC (рис. S3B и S3C). После предварительной обработки клеток ингибитором панкаспазы, Z-VAD-FMK, Q6-индуцированный апоптоз значительно снизился с 28.От 14% до 8,55% в клетках HepG2 и от 31,71% до 12,81% в клетках Bel-7402 (), в то время как Q6-индуцированное расщепление PARP1 было ослаблено (), что означает, что каспазозависимый путь участвует в Q6-индуцированном апоптозе.

Нарушение потенциала митохондриальной мембраны (ΔΨm) — еще одно важное внутриклеточное событие, которое происходит во время апоптоза. Используя анализ JC-1, мы обнаружили, что по сравнению с соответствующими контролями введение Q6 в течение 24 часов резко снижает ΔΨm в зависимости от концентрации (рис.S3D).

Наконец, используя анализ исключения трипанового синего, мы обнаружили, что Q6 (10 мкМ) индуцировал 44% гибели клеток в клетках HepG2 и 51% в клетках Bel-7402. После предварительной обработки клеток Z-VAD-FMK гибель клеток, индуцированная Q6, была значительно снижена с 44% до 15% в клетках HepG2 и с 51% до 18% в клетках Bel-7402 (рис. S3A), что означает увеличение апоптоз — важный механизм, с помощью которого Q6 убивает опухолевые клетки при гипоксии.

Таким образом, эти эксперименты продемонстрировали, что Q6 индуцирует нарушение потенциала митохондриальной мембраны, тем самым запуская каспазозависимый апоптоз.

Q6 подавляет экспрессию HIF1A и активность транскрипции

Предыдущие исследования продемонстрировали взаимосвязь между лекарственной устойчивостью и прогрессированием опухоли со сверхэкспрессией HIF1A; мы наблюдали, что Q6 может значительно ингибировать HIF1A и связанную с ним сигнальную трансдукцию. Во-первых, мы исследовали, что обработка Q6 (от 0 до 5 мкМ) в течение 6 часов резко снижает индуцированную гипоксией экспрессию белка HIF1A в клетках HepG2 и Bel-7402 в зависимости от концентрации. (; Инжир.S5A). Учитывая, что ингибирование накопления HIF1A в гипоксических клетках может быть коррелировано с цитотоксичностью, индуцированной Q6, были проведены параллельные исследования жизнеспособности клеток. Результаты показали, что не было значительного изменения жизнеспособности клеток после обработки Q6 (фиг. S4A), предполагая, что Q6-индуцированное снижение уровней HIF1A не является результатом его цитотоксического действия. После этого мы оценили, что Q6 может ингибировать HIF1A-опосредованную транскрипционную активность зависимым от концентрации образом в клеточных линиях HepG2 и Bel-7402, как было определено с использованием гипоксически-зависимой репортерной конструкции, содержащей ген люциферазы под контролем HRE (). .

Рисунок 2. Q6 подавляет индуцированную гипоксией экспрессию белка HIF1A и опосредованную HIF1A передачу сигнала. ( A и C ) Клетки HepG2 (слева) и Bel-7402 (справа) подвергали воздействию гипоксии или нормоксии и обрабатывали Q6 (от 0 до 5 мкМ) в течение 6 часов. ( A ) Уровни белка HIF1A, EPAS1 и VEGFA определяли с помощью вестерн-блоттинга. ACTB был проанализирован как контроль нагрузки. Данные представляют 3 независимых эксперимента. ( B ) HRE-зависимый репортерный анализ использовали для определения влияния Q6 на транскрипционную активность HIF1A.Было проведено пять независимых экспериментов, и значения были выражены как среднее ± SD ** P <0,01 и *** P <0,001 по сравнению с необработанными контролями при гипоксии. ( C ) Тотальную РНК экстрагировали и экспрессию мРНК VEGFA анализировали с помощью ОТ-ПЦР, используя GAPDH в качестве контрольного гена. Было проведено пять независимых экспериментов, и значения были выражены как среднее ± SD ** P <0,01 по сравнению с необработанным контролем при гипоксии.

Многочисленные исследования продемонстрировали, что HIF1A-опосредованная экспрессия VEGFA считается основным индуктором ангиогенеза. ¹⁷ ^, ¹⁸ Таким образом, в этом исследовании мы предположили, что Q6 может ингибировать экспрессию VEGFA. Как изображено на фиг. 6, Q6 значительно подавлял экспрессию белка VEGFA и уровни мРНК в зависимости от концентрации в условиях гипоксии, дополнительно подтверждая, что Q6 подавляет индуцированную HIF1A передачу сигнала.

Более того, предыдущие отчеты показали, что HIF1A и EPAS1 / HIF2A особенно важны в опосредовании клеточных ответов на гипоксию и часто регулируются одними и теми же механизмами.¹⁹ Однако Q6 не смог оказать влияние на уровни белка EPAS1 в клетках HepG2 и Bel-7402 (), что указывает на то, что Q6-индуцированная супрессия HIF1A может происходить по механизму, о котором ранее не сообщалось.

Вместе эти результаты продемонстрировали, что обработка Q6 подавляет экспрессию и передачу сигналов HIF1A, но не влияет на EPAS1.

Путь аутофагия-лизосома участвует в Q6-индуцированном ингибировании экспрессии HIF1A

Чтобы изучить механизмы, лежащие в основе Q6-индуцированной супрессии HIF1A, мы сначала исследовали, происходит ли снижение HIF1A с помощью Q6 на уровне транскрипции.Анализ ПЦР в реальном времени показал, что уровни мРНК HIF1A не претерпели значительных изменений после обработки Q6 в клетках Bel-7402 и HepG2 (). Кроме того, мы обнаружили, что Q6 не влияет на пути передачи сигналов EGFR, PIK3CA-AKT1 или MAPK, которые, как недавно было показано, контролируют синтез белка HIF1A (фиг. S4; таблица S1). На основании этих открытий мы предположили, что механизм деградации может быть задействован в Q6-индуцированном снижении HIF1A. Чтобы изучить эту возможность, для предотвращения синтеза белка de novo использовали циклогексимид (CHX, ингибитор синтеза белка); таким образом, изменения в уровнях HIF1A в первую очередь отражают деградацию белка.Мы подвергали клетки HepG2 и Bel-7402 воздействию CHX в условиях гипоксии в присутствии или в отсутствие Q6 в разные моменты времени и измеряли экспрессию HIF1A. Как показано на фиг. 7, хотя интенсивность сигнала HIF1A явно не изменилась в необработанных клетках Q6, снижение уровней белка HIF1A наблюдали в клетках, обработанных Q6, в зависимости от времени. Вместе эти результаты показывают, что Q6 подавляет экспрессию белка HIF1A за счет ускорения его деградации.

Рисунок 3. Q6 ускоряет деградацию белка HIF1A через путь аутофагия-лизосома. ( A ) Клетки HepG2 (слева) и Bel-7402 (справа) подвергали воздействию Q6 (от 0 до 5 мкМ) в течение 6 часов в условиях гипоксии. Тотальную РНК экстрагировали, и экспрессию мРНК HIF1A анализировали с помощью ОТ-ПЦР, используя GAPDH в качестве контрольного гена. Было проведено пять независимых экспериментов, и значения были выражены как среднее ± стандартное отклонение ( B ). Клетки HepG2 и Bel-7402, подвергшиеся гипоксии, обрабатывались CHX в присутствии или в отсутствие Q6 (5 мкМ) в течение разного времени и HIF1A. Затем уровни белка измеряли с помощью вестерн-блоттинга.ACTB измеряли в качестве контроля нагрузки. ( C ) Клетки HepG2 и Bel-7402 предварительно обрабатывали MG132 (ингибитор протеасом) или 3-MA (ингибитор лизосом аутофагии) в течение 30 минут, чтобы обеспечить функциональное ингибирование протеасом и лизосом. Затем клетки подвергали гипоксии в присутствии или в отсутствие Q6 (5 мкМ) в течение 6 часов, после чего уровни белка HIF1A определяли с помощью вестерн-блоттинга. ACTB измеряли в качестве контроля нагрузки. ( D ) Ультраструктурные особенности клеток HepG2 и Bel-7402 с обработкой Q6 (5 мкМ) или без нее в течение 6 часов анализировали с помощью электронной микроскопии.Типичные изображения аутофагосом (стрелки) и автолизосом (наконечники стрелок) показаны при большем увеличении. На нижней панели количество аутофагосом (AP) и автолизосом (AL) было представлено для клеток HepG2 и Bel-7402. В каждом эксперименте было подсчитано по 20 сечений. Показанные данные представляют собой средние значения ± стандартное отклонение 3 независимых экспериментов. * P <0,05 по сравнению с контрольной группой HepG2. ** P <0,01 по сравнению с контрольной группой HepG2. ^## P <0.01 по сравнению с контрольной группой Бел-7402. ( E ) Клетки HepG2 и Bel-7402 обрабатывали Q6 (от 0 до 5 мкМ) в течение 6 часов, и уровни белков LC3B-I и LC3B-II измеряли с помощью вестерн-блоттинга. ACTB измеряли в качестве контроля нагрузки. Данные представляют 2 независимых эксперимента.

Лизосомная и протеасомная деградация — это два основных пути обмена клеточного белка. Следовательно, 2 линии клеток HCC были предварительно обработаны MG132 (специфический ингибитор протеасом) или 3-MA (3-метиладенин, неспецифический ингибитор лизосом аутофагии) перед добавлением Q6.Результаты показали, что обработка 3-МА отменяла индуцированное Q6 снижение уровней белка HIF1A в обеих клеточных линиях, в то время как воздействие MG-132 не давало заметного эффекта (). В соответствии с этим предварительная обработка другим ингибитором лизосом CQ может также обратить вспять индуцированное Q6 подавление уровней белка HIF1A (фиг. S6A).

Эти данные показывают, что Q6-индуцированное снижение уровней белка HIF1A опосредуется путем аутофагия-лизосома, тогда как классический протеасомный путь не участвует.

Аутофагия регулирует индуцированную Q6 деградацию HIF1A

Многие предыдущие исследования продемонстрировали, что основной путь доставки клеточных белков в лизосомы происходит через аутофагию. ²⁰ ^, ^{21 год} Как упоминалось выше, мы предположили, что аутофагия вызывается Q6. Для обнаружения образования аутофагосом использовали два хорошо зарекомендовавших себя метода. Во-первых, мы исследовали количество аутофагических вакуолей, присутствующих в клетках, с помощью ультраструктурного анализа на основе электронной микроскопии.Как показано на фиг.3, в группе лечения Q6 наблюдались типичные аутофагические структуры, включая двухмембранные структуры, содержащие цитоплазматическое содержимое (аутофагосомы), а также одномембранные структуры, содержащие цитоплазматические материалы на разных стадиях деградации (автолизосомы). Затем мы исследовали преобразование MAP1LC3B (LC3B), ортолога дрожжевого Atg8, широко известного маркера аутофагии, для оценки уровней аутофагии в обработанных Q6 клетках. Во время образования аутофагосом расщепленный LC3B-I превращается в липидированный LC3B-II, что представляет собой ключевое событие в регуляции этого процесса.Как показано на фиг. S5A, Q6 стимулировал значительно повышенные уровни экспрессии белка LC3B-II, что указывает на индукцию аутофагии. Кроме того, поскольку LC3B-II постоянно разрушается в автолизосомах во время аутофагии, рекомендуется обрабатывать клетки лизосомальным ингибитором перед вестерн-блоттингом, чтобы LC3B-II получил доступ к аутофагическому потоку. Здесь, в этом исследовании, 2 лизосомальных ингибитора бафиломицина A ₁ и CQ были использованы для предварительной обработки клеток перед добавлением Q6. Как показано на рисунке S5B, Q6 может увеличивать накопление белка LC3B-II в зависимости от времени, но большее количество накопления LC3B-II наблюдалось в предварительно обработанных бафиломицином A ₁ / CQ клетках, что указывает на индукцию аутофагического потока Q6. .Однако лечение другими агентами, нацеленными на гипоксию, такими как TPZ, не имело видимого эффекта на индукцию аутофагии и опосредованную аутофагией деградацию HIF1A (рис. S5C – S5E).

Кроме того, мы определили, участвуют ли гены, связанные с аутофагией, в Q6-индуцированном сокращении HIF1A, и использовали подходы РНК-интерференции. Для образования аутофагосом необходимы 2 убиквитин-подобные системы конъюгации, конъюгат ATG12-ATG5 и системы MAP1LC3 (LC3), которые тесно связаны с расширением мембран аутофагосом.Истощение экспрессии ATG5 и LC3B в этих клетках ингибировало Q6-индуцированную аутофагию и увеличивало период полужизни белка HIF1A в зависимости от концентрации и времени (фиг. S6C). Эти данные также предполагают, что аутофагия регулирует индуцированный Q6 оборот HIF1A в клетках HCC.

Рисунок 4. ATG5 и LC3B необходимы для индуцированной Q6 аутофагии и деградации HIF1A. ( A и B ) После трансфекции специфически направленной миРНК ( ATG5 или LC3B ) в течение 36 часов клетки HepG2 и Bel-7402 обрабатывали Q6 (0, 2.5, 5 мкМ) в течение 6 часов, после чего уровни белков HIF1A, ATG5 и LC3B измеряли с помощью вестерн-блоттинга. ACTB измеряли в качестве контроля нагрузки. ( C и D ) После трансфекции специфически направленной миРНК ( ATG5 или LC3B ) в течение 36 часов клетки HepG2 и Bel-7402 обрабатывали Q6 (5 мкМ) в течение разного времени, после чего уровни белка HIF1A были измерено вестерн-блоттингом. ACTB измеряли в качестве контроля нагрузки. ( E ) Клетки HepG2 обрабатывали Q6 (0,5 мкМ) в течение 6 часов в условиях гипоксии, после чего белок HIF1A детектировали с помощью анализа иммуноэлектронной микроскопии.Стрелки указывают HIF1A. На нижней панели количество меченных иммуно-золотом HIF1A представлено для клеток HepG2. В каждом эксперименте было подсчитано 20 поперечных сечений, и всего было обнаружено 40 аутофагосом. Показанные данные представляют собой средние значения ± стандартное отклонение 3 независимых экспериментов. ** P <0,01 по сравнению с контрольной группой.

Кроме того, чтобы определить, может ли HIF1A поглощаться аутофагосомами, клетки HepG2 и Bel-7402 подвергали воздействию бафиломицина A ₁ и / или Q6, а затем подвергали последующим иммунофлуоресцентным анализам.На фигуре S6B показано, что точки HIF1A в основном совместно локализованы с точкой LC3B в клетках, обработанных Q6, тогда как в клетках, не подвергавшихся обработке Q6, HIF1A локализуется в ядре с ограниченными количествами, обнаруживаемыми в цитоплазме. Соответственно, другое подтверждающее свидетельство было подтверждено с помощью иммуно-трансмиссионной электронной микроскопии иммуно-золотого мечения: HIF1A (стрелка) был изолирован в двухмембранных структурах после обработки Q6. Вместе эти данные показывают, что Q6 активирует аутофагию и что HIF1A поглощается аутофагосомами, а затем доставляется в лизосомы для деградации.

Накопительные исследования показали, что аутофагия является важным механизмом предотвращения накопления полиубиквитинированных белковых агрегатов, а недавние исследования показали, что SQSTM1 распознает полиубиквитинированные белковые агрегаты, а затем связывается с LC3B на аутофагосомных мембранах, тем самым доставляя агрегаты для разложения. ²² Таким образом, мы предположили, что SQSTM1 может распознавать полиубиквитинированный белок HIF1A. Первое подтверждающее свидетельство было предоставлено иммунофлуоресцентным анализом, в котором значительное увеличение уровней HIF1A было обнаружено в цитоплазме после обработки Q6, и, таким образом, совместная локализация между HIF1A и SQSTM1 была усилена ().Анализ коиммунопреципитации с использованием антител к SQSTM1 и HIF1A дополнительно показал, что в базовых условиях нет связи между эндогенным SQSTM1 и HIF1A, и эта связь значительно увеличивается после обработки Q6. В частности, совместная обработка Q6 бафиломицином A ₁ вызывает накопление HIF1A и SQSTM1 в аутофагосомах и лизосомах, таким образом, наблюдалась более очевидная полоса HIF1A. ().

Рисунок 5. SQSTM1 регулирует деградацию HIF1A. ( A ) Клетки HepG2 и Bel-7402 подвергались воздействию Q6 (0,5 мкМ) в присутствии / в отсутствие бафиломицина A ₁ (BafA1; 0.2 мкМ) в течение 6 часов в условиях гипоксии, а затем уровни белков HIF1A и SQSTM1 анализировали с помощью конфокальной микроскопии. Масштабная линейка 20 мкм. ( B ) Клетки HepG2 (слева) и Bel-7402 (справа) обрабатывали Q6 (0,5 мкМ) или Q6 (0,5 мкМ) + бафиломицин A ₁ (0,2 мкМ) в течение 6 часов, а затем анализировали на уровни экспрессии белка, указанные с помощью иммунопреципитации или вестерн-блоттинга. 10% лизата, используемого для IP, загружали для WCL. ( C ) После трансфекции миРНК SQSTM1 в течение 36 часов клетки HepG2 (слева) и Bel-7402 (справа) обрабатывали Q6 (0, 2.5, 5 мкМ) в течение 6 ч, после чего уровни белка HIF1A измеряли с помощью вестерн-блоттинга. ACTB измеряли в качестве контроля нагрузки.

Кроме того, нокдаун SQSTM1 частично нарушает Q6-индуцированную деградацию HIF1A (; Рис. S9), предполагая, что SQSTM1 может играть критическую роль в индуцированной Q6 деградации HIF1A, доставляя белок HIF1A к аутофагосомам для деградации.

Наконец, все эти наблюдения в совокупности предполагают, что Q6-индуцированное снижение уровней белка HIF1A объясняется аутофагией деградации и SQSTM1 участвует в этом процессе.

Q6 останавливает рост опухоли in vivo

Учитывая превосходную противоопухолевую активность Q6 in vitro, мы предположили, что он должен быть способен замедлять рост опухоли in vivo. Как показано в таблице S2, введение Q6 значительно ингибировало рост опухолей ксенотрансплантата Bel-7402 и гепатомы h32. Кроме того, стоит отметить, что обработка Q6 не вызвала очевидной потери веса ни в одной из двух моделей in vivo (Таблица S2). Затем мы выполнили вестерн-блот-анализ ксенотрансплантатов опухоли и исследовали, что введение Q6 заметно активировало каспазозависимый путь апоптоза в опухолях, происходящих из клеток Bel-7402.Наконец, вестерн-блоттинг, иммуногистохимический анализ и иммунофлуоресценция подтвердили, что обработка Q6 ингибировала экспрессию HIF1A, VEGFA и CD31 в опухолях мышей, обработанных Q6, что указывает на то, что Q6 подавляет активность HIF1A и связанные с ней механизмы передачи сигналов in vivo ( ; Рис. S7).

Рисунок 6. Q6 останавливает рост опухоли in vivo. ( A – E ) Голых мышей с установленными опухолями Bel-7402 лечили TPZ или Q6 в дозе 25 или 12,5 мг / кг ежедневно внутрибрюшинно. инъекция за 27 дн.( A ) Объемы опухоли выражены как среднее значение ± SEM *** P <0,001 по сравнению с обработанными носителем контролями (n = от 5 до 8 на группу). ( B ) Относительная масса тела выражена как среднее значение ± SEM ** P <0,01 по сравнению с контрольными животными, обработанными носителем (n = от 5 до 8 на группу). ( C ) Вестерн-блоттинг опухолей, полученных из клеток Bel-7402, обработанных Q6 (12,5 мг / кг) или носителем для экспрессии PARP1, CASP3, расщепленного CASP3, HIF1A и VEGFA. ACTB измеряли в качестве контроля нагрузки.( D и E ) Влияние Q6 на уровни экспрессии HIF1A и VEGFA в опухолях, происходящих из клеток Bel-7402, определяли с помощью окрашивания гематоксилином и эозином, а также иммуногистохимического и иммунофлуоресцентного анализа. ( F ) Схематические диаграммы, изображающие механизм, с помощью которого Q6 оказывает свое противораковое действие. С одной стороны, Q6 запускает каспазозависимый путь апоптоза и вызывает гибель клеток HCC как in vitro, так и in vivo. С другой стороны, Q6 активирует ATG5 и LC3B-зависимый путь аутофагии, который играет важную роль в деградации HIF1A, а также в антиангиогенезе и антиметастатической активности Q6.Кроме того, взаимодействие с SQSTM1 регулирует деградацию HIF1A. Таким образом, эти данные убедительно подтверждают вывод о том, что Q6 является новым лекарственным средством, направленным на гипоксию для лечения ГЦК, и мы предполагаем, что аутофагия действует как опухолевый супрессор, ускоряя деградацию HIF1A и останавливая ангиогенез и метастатические процессы.

В совокупности наши результаты продемонстрировали, что Q6 резко останавливает рост опухоли in vivo с помощью двойных регулирующих механизмов, нацеленных на гипоксию.

Обсуждение

Учитывая связь гипоксии с резистентностью к лечению и плохим прогнозом, основная цель этого исследования заключалась в изучении ответов нескольких линий клеток HCC на новый 3′-замещенный аналог TPZ и механизма, участвующего в опосредовании этих ответов. .Это исследование первоначально выявило значительную противоопухолевую активность препарата Q6, нацеленного на гипоксию, как in vitro, так и in vivo . Что еще более важно, настоящее исследование впервые продемонстрировало, что аутофагическая деградация способствует лекарственному протеолизу HIF1A, тем самым проливая свет на новую роль аутофагии как регулятора экспрессии HIF1A в терапевтических средствах, нацеленных на гипоксию.

Наличие гипоксических областей является обычным признаком солидных опухолей человека, и некоторые методы лечения ГЦК, такие как трансартериальная химиоэмболизация (ТАХЭ), также могут вызывать гипоксию.²³ Наиболее устоявшимся подходом к борьбе с гипоксией является введение HAP, которые могут специфически устранять гипоксические опухолевые клетки. Ведущее соединение, TPZ, продемонстрировало избирательную токсичность по отношению к гипоксическим клеткам в культуре клеток и на доклинических моделях опухолей. Тем не менее, рандомизированные клинические испытания фазы II и III, которые были завершены к настоящему времени, показали ограниченное улучшение контроля над опухолью, особенно отсутствие эффективного внесосудистого транспорта и значительно увеличенную токсичность.²⁴ Таким образом, HAP нового поколения, такие как AQ4N и TH-302, были разработаны и потенциально преодолевают некоторые из признанных ограничений TPZ. В этом исследовании мы обнаружили, что 3′-замещенный аналог TPZ, Q6, демонстрирует в 10 раз более высокую антипролиферативную эффективность in vitro по сравнению с TPZ в отношении клеток HCC. Более того, как и TPZ, противоопухолевая активность Q6 частично опосредуется активацией каспазозависимого пути апоптоза. Предварительная обработка клеток ингибитором панкаспазы, Z-VAD-FMK, ослабляла Q6-индуцированное расщепление PARP1 и блокировала процесс апоптоза.При рассмотрении HAP для лечения рака важным фактором является не только эффективность, но и безопасность. Мы оценили токсичность Q6 in vitro и обнаружили, что он не проявляет явной токсичности в 2 нормальных клеточных линиях печени. Точно так же наши исследования первичной токсичности показали, что хотя 200 мг / кг TPZ были летальными, мыши, получавшие Q6 в дозе 1000 мг / кг, выжили, что указывает на снижение системной токсичности Q6 in vivo (неопубликованные наблюдения). В совокупности эти данные убедительно подтверждают вывод о том, что Q6 является сильнодействующим пролекарством, избирательным к гипоксии, с ограниченной токсичностью.

Уникальный механизм, который, вероятно, лежит в основе высокой эффективности нового гипоксически-активируемого пролекарства Q6, заключается в том, что он использует феномен опосредованной гипоксией экспрессии генов. В недавних клинических испытаниях многие агенты, подавляющие экспрессию HIF1A и передачу сигнала, такие как YC-1, сорафиниб и доксорубицин, имели значительно повышенную активность при использовании в сочетании с HAP, такими как TPZ, PR-104 и TH-302. Например, сообщалось, что TH-302 усиливал противоопухолевую активность доксорубицина на широкой панели моделей ксенотрансплантатов in vivo, включая немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ), рак толстой кишки, рак простаты, фибросаркому, меланому и рак поджелудочной железы.²⁵ Таким образом, это более глубокое понимание механизмов двойной регуляции, нацеленных на гипоксию, может иметь хорошие перспективы для разработки новых подходов к лечению рака. Кроме того, мы продемонстрировали, что Q6 подавляет опосредованную HIF1 экспрессию VEGFA как in vitro, так и in vivo . В совокупности эти наблюдения убедительно подтверждают вывод о том, что Q6 является лекарственным средством, нацеленным на гипоксию, с двойным модулирующим действием, что представляет собой как возможность, так и проблему для разработки и синтеза новых HAP.

Все эукариотические клетки используют систему убиквитин-протеасома и путь аутофагия-лизосома для деградации белка, и считается, что протеасома используется для селективной деградации короткоживущих и аномальных / ошибочных белков, таких как TP53 / p53 или HIF1A. По этому пути HIF1A сначала гидроксилируется пролилгидроксилазами, а затем скаффолдируется на лигазном комплексе убиквитина E3, который включает продукт гена VHL (опухолевый супрессор фон Хиппеля-Линдау, убиквитин протеинлигаза E3).В конечном итоге это приводит к быстрому убиквитинированию и протеасомной деградации. ¹³ Между тем, аутофагия была идентифицирована как решающий клеточный процесс, который предотвращает накопление аномальных белков и органелл во многих физиологических и фармакологических условиях. На мышах с условным, специфичным для печени нокаутом Atg7 было продемонстрировано, что потеря аутофагии вызывает дисфункцию печени, сопровождаемую внутриклеточным накоплением агрегатов убиквитинированного белка.^{26 год} Недавно в статье было продемонстрировано, что полностью транс-ретиноевая кислота индуцирует клиренс PML-RARA посредством аутофагии, что способствует дифференцировке клеток. ²⁷ Эти сообщения предполагают, что базальная конститутивная аутофагия необходима для того, чтобы избежать накопления убиквитинированных белковых агрегатов, и что аутофагия, индуцированная лекарствами, может играть положительную роль в подавлении критических белков в терапии рака.

Несколько линий доказательств указывают на то, что индуцированная гипоксией аутофагия (или аутофагия митохондрий) может быть инициирована HIF1A и обычно представляет собой адаптивный механизм, который поддерживает жизнеспособность раковых клеток в гипоксической среде.Интересно, что в этом исследовании мы обнаружили, что аутофагический поток резко активируется во время курса лечения Q6 независимым от HIF1A образом (данные не показаны) и впоследствии запускает опосредованную аутофагией деградацию HIF1A. Ингибирование индуцированной Q6 аутофагии могло бы спасти деградацию HIF1A и одновременно ослабить способность Q6 убивать клетки. В отличие от индуцированной гипоксией и HIF1A-зависимой защитной аутофагии, о которой сообщалось ранее, гибель аутофагических клеток, вызванная Q6, может представлять собой тип острой аутофагии, вызванной лекарственной стимуляцией, а не стрессами микросреды и метаболизма.^{28 год} ^, ²⁹ Заключение о зависимой от аутофагии лизосомной деградации HIF1A под действием Q6 основано на нескольких наблюдениях: 1) HIF1A был обнаружен в подобных аутофагосомам двойных мембранных структурах после обработки Q6; 2) ингибирование аутофагии путем подавления основных генов аутофагии, таких как ATG5 и LC3B , или ингибитором аутофагии (3-MA), предотвращало индуцированную Q6 деградацию HIF1A в зависимости от времени и концентрации; и 3) предварительная обработка ингибитором протеасом, MG-132, не могла обратить вспять Q6-индуцированную деградацию HIF1A в любой из клеточных линий HCC.Таким образом, настоящее исследование впервые демонстрирует, что аутофагическая деградация способствует лекарственному протеолизу HIF1A, а также проливает свет на новую роль аутофагии как регулятора экспрессии HIF1A в терапевтических подходах, направленных на гипоксию при раке печени.

Кроме того, наши результаты также демонстрируют, что аутофагия способствует деградации HIF1A за счет усиленного взаимодействия с SQSTM1. Ранее сообщалось, что SQSTM1 является селективным субстратом аутофагии, связывающим полиубиквитинированные белки (через свой C-концевой убиквитин-ассоциированный домен) и LC3 (через недавно идентифицированную взаимодействующую область LC3), который действует как адаптер, нацеливаясь на агрегаты убиквитинированного белка для деградация аутофагией.³⁰ В нашем исследовании без воздействия Q6 HIF1A в основном располагался в ядре, тогда как SQSTM1 преимущественно располагался в цитоплазме. Это совершенно разное пространственное распределение препятствует ассоциации между двумя белками, поэтому мы не смогли обнаружить взаимодействие между HIF1A и SQSTM1 в наших экспериментальных системах, хотя в условиях гипоксии имеет место некоторая конститутивная аутофагия. Напротив, после обработки Q6 мы наблюдали значительную транслокацию HIF1A из ядра в цитоплазму, где HIF1A взаимодействовал с SQSTM1 и подвергался лизосомной деградации.Кроме того, мы также обнаружили, что нокдаун SQSTM1 не смог полностью отменить Q6-индуцированную деградацию HIF1A, что указывает на то, что некоторые другие белки-карго могут участвовать в Q6-индуцированной лизосомной деградации HIF1A. Для подтверждения этой гипотезы необходимы дальнейшие исследования.

Основываясь на работе, представленной здесь, и на ранее опубликованных данных, мы предлагаем более детальную концептуальную модель, включающую многообещающую стратегию лечения рака, направленную на гипоксию (). В этой модели Q6 запускает каспазозависимый путь апоптоза и вызывает гибель клеток HCC.С другой стороны, Q6 также активирует путь аутофагии, который играет важную роль в ускорении деградации HIF1A и подавлении его нижележащего гена-мишени, VEGF . Более того, мы определили, что апоптоз и аутофагия, запускаемые Q6, являются двумя взаимно независимыми событиями, оба из которых вносят вклад в двойные регулирующие механизмы, нацеленные на гипоксию, и могут в конечном итоге привести к противоопухолевой активности Q6. (Рис. S8A и S8B). Таким образом, эти данные раскрывают новую роль аутофагии как регулятора экспрессии HIF1A и HIF1A-опосредованной передачи сигнала при гипоксии и решительно подтверждают вывод о том, что Q6 имеет потенциальную клиническую ценность в терапии ГЦК.

Материалы и методы

Реагенты и культура клеток

Q6 был предоставлен профессором Yong-zhou Hu (Университет Чжэцзян, Ханчжоу, Китай). TPZ (тирапазамин) был приобретен у Topharman Shanghai Co. Ltd. 3-MA (M9281) был у Sigma-Aldrich. Первичные антитела к расщеплению — CASP3 (9661), фосфо-MAPK1 / 3 (9106), фосфо-MAPK14 (9216), VEGFA (2463), ATG5 (8540), LC3B (2775), RARA (2554) и ACTB (4967) антитела были получены от Cell Signaling Technologies. Антитела к CASP3 (sc-7272), PARP1 (sc-7150) и SQSTM1 (sc-25575) и меченные HRP вторичные антитела коз (sc-2354), антимышиные (sc-2005) и антикроличьи (sc-2004) антитела были от Santa Cruz Biotechnology.Антитело к HIF1A (610959) было получено от BD Biosciences. Антитело к CD31 (ab28364) было получено от Abcam. Другие противораковые агенты и ингибиторы были получены от Sigma-Aldrich.

Для двух линий клеток HCC Bel-7402 (TcHu10) был получен из Cell Bank of China Science, а HepG2 (HB8065) был получен из Американской коллекции типовых культур (ATCC). Клетки Bel-7402 / HepG2, обычно культивируемые в среде RPMI 1640 (Gibco, 31800-022) / DMEM (Gibco, 12800-017), содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (Hyclone, Sh40088.03) и 1% антибиотиков во влажной атмосфере с 5% CO ₂ при 37 ° C. Обработку гипоксии проводили путем помещения клеток в CO ₂ инкубатор с водяной рубашкой (Thermo Forma, 3110), заполненный смесью 0,6% O ₂, 5% CO ₂ и 94,4% азота.

Проточно-цитометрический анализ клеточного цикла, апоптоза и потенциала митохондриальной мембраны (ΔΨm)

Клетки обрабатывали Q6 и / или общим ингибитором каспаз, Z-VAD-FMK (Imgenex, IMI-2311).После сбора и двукратной промывки холодным буфером PBS для анализа апоптозных клеток использовали набор для обнаружения апоптоза ANXA5-FITC / PI (Biovision, K101-100). Для окрашивания JC-1 клетки ресуспендировали в PBS, содержащем 0,1 мкл JC-1 (Sigma, T4069), и инкубировали при 37 ° C в течение 15 минут в темноте. Все образцы анализировали с помощью цитометра FACS-Calibur (Becton Dickinson).

Трансфекция гена и РНКи

Клетки высевали на 6-луночные планшеты и через 24 часа трансфицировали липофектамином 2000 (Invitrogen, 11668-019) в соответствии с инструкциями производителя. миРНК ATG5 человека, миРНК MAP1LC3B (LC3B) миРНК HIF1A миРНК, SQSTM1 / p62 миРНК и контрольная миРНК были получены от GenePharma Co. Ltd. инъекция клеток Bel-7402 (5 × 10 ⁶ клеток на животное, подкожно в подмышку) самцам бестимусных мышей BALB / c в возрасте от 5 до 6 недель (Национальные ресурсы лаборатории грызунов по животным). Лечение было начато, когда опухоли достигли среднего размера группы около 100 мм. ³.Объем опухоли (³ мм) измеряли штангенциркулем и рассчитывали как (W ² × L) / 2, где W — ширина, а L — длина. Атимическим мышам внутривенно вводили Q6 (12,5 мг / кг) и TPZ (25 мг / кг), растворенные в кремофоре: этаноле: 0,9% стерильном растворе хлорида натрия (1: 1: 8, объем) один раз в день. Вес мышей и объем опухолей регистрировали каждые 2 дня до умерщвления животных. Уход за животными проводился в соответствии с установленными правилами.

Статистический анализ

Результаты выражены как среднее значение ± стандартное отклонение не менее 3 независимых экспериментов.Различия между двумя средними значениями анализировали с помощью теста Стьюдента t и считали статистически значимыми, когда P <0,05.

Полное описание дополнительных материалов и методов, использованных в этих исследованиях, приводится во вспомогательной информации.

תקדמים עם קורס טכנאי סלולר

קורס טכנאי סלולר מאפשר לבוגרים להשתלב במגוון חברות, מעבדות ולפתוח עסק עצמאי. במהלך הקורס, תתפים לומדים הכל על מערכות סלולר, מיסודות החשמל והאלקטרוניקה, דרך הלחמה, תיקון ושחזור מידע.עדיין מתלבטים מה לעשות עכשיו? במיוחד עבורכם פנינו אל המינהל הטכני ושמענו על כל הסיבות להצטרף לקורס.

7 יבות להצטרף לקורס טכנאי סלולר

תם נמצאים בנקודה בה אתם חושבים על הצעד בעבודה, תם רוצים לשקול הצטרפות לקורס ממוקד שיפתח לכם תח לשלב ריירייי ור

1. הגיע הזמן לעשות שינוי

רגע שאתם מרגישים שהגיע הזמן לעשות שינוי, אתם צריכים לבחון את האפשרויות שעומדות לרשותכם. יכול להיות שהשתחררתם לא מזמן ואתם רוצים להשתלב במהירות במקום עבודה שייתן לכם הזדמנויות שונות ויכול להיות שאתם נמצאיםי י ו יות שאתם נמצאיםי י ואם הגיע הזמן לעשות שינוי, יתכן והגיע הזמן להפוך לטכנאי סלולר.

2. ללמוד כדי לעבוד

המינהל הטכני מוביל עם המוטו «ללמוד כדי לעבוד». הרעיון מאחורי זה אומר שאתם עומדים לקבל את כל המידע שנדרש לכם והכשרה מקיפה כך שתוכלו להתחיל לעבוד בתחום מיד בסיום הלימודים. בקרוב תוכלו להשתלב בחברות מובילות במשק, במעבדות ואם תרצו, תוכלו לפתוח עסק משלכם. כל זאת בתחום שהדרישה אליו רק הולכת ועולה.

3. לימודים בשעות שמתאימות לכם

תם עובדים כרגע, אחד הדברים שאתם בוודאי דואגים לגביו הוא איך תוכלו לשנות את העתיד בלי לפגוע בהווה.חשיבה זו הכרחית לתכנון נכון של הצעד הבא ואתם תוכלו להצטרף לקורס ערב, קורס בימי שישי ואפילו קורס מזורז שמתקיים אחד על י. כל האפשרויות פתוחות בפניכם, עכשיו זה הזמן שלכם ת לדרך.

4. תם לפתוח עסק עצמאי

יכול להיות שתמיד חלמתם להיות עצמאיים ויכול להיות שאתם מרגישים שזה כורח הנסיבות. כמעט בכל תחום יש תחרות ובוודאי חשוב לכם לבחור באחד שהדרישה בו גבוהה. פתיחת עסק כשיש לכם השכלה מתאימה וכלים לתת מענה רחב למגוון רחב של אנשים ובעיות, יכול להיות בדיוק ההתחלה שייחלתם לה.

5. תם רוצים לנצל את היכולות הטכניות שלכם

ישנם אנשים עם «ידיים שמאליות» ואנשים עם «ידי זהב». אם תמיד אמרו עליכם שיש לכם ידיים טובות וכישרון טכני, תם יכולים לנצל זאת ולהפוך לטכנאי סלולר. תיקון מכשיר סלולרי ידרוש מכם הבנה במכשירים השונים, יכולת איתור התקלה, יבה על תרון המתאים ופעמים רבות ביצועי וו. אם יש לכם כישרון, זו ההזדמנות להשתמש בו ביום יום.

6. חשוב לכם ללמוד מקצוע עם דרישה גבוהה

הדרישה לתיקון וטיפול במכשירים הסלולריים לא עומדת לדעוך בקרוב.המכשירים החכמים מלווים ימשיכו ללוות אותנו עוד שנים רבות וככל שהם יכילו יותר מידע שימושי כך רישה לשירותי תיקו תמש. אם תם רוצים ללמוד מקצוע שתוכלו לעבוד בו מיד וגם בטווח הרחוק, זה המקום בשבילכם.

7. תם רוצים לימודים מקצועיים, יסודיים וממוקדים

הרעיון העומד מאחורי קורס טכנאי סלולר הוא לאפשר למשתתפים לקבל מקצוע. כלומר, ללמוד ועם קבלת התעודה להתחיל לעבוד ולהשתלב בעולם העבודה. הקורס של המינהל הטכני מקיף, נוגע בכל התחומים הרלוונטיים לעבודה בפועל. כלומר, אלו לא רק לימודים תיאורטיים אלא לימודים שתוכלו לקחת אתכם הלאה, לשלב הבא בקריירה.

למה ללמוד במינהל הטכני?

לאחר שברור שישנם יתרונות רבים להכשרה בתחום טכנאי הסלולר, נשאלת השאלה היכן הכי כדאי ללמוד ומהם היתרונות של ינהל הטכני. בחינה מעמיקה מראה שכאן תקבלו הכשרה מעמיקה, ברמה ג-ד ולא רק ברמה בסיסית (א-ב) רת רק להחליף את החלקים הפלסטיים של המכשיר.

ינהל הטכני מציע קורסים בשעות הערב, בימי שלישי וכקורס מואץ במסלול פרטני ובכך מאפשר ללמוד בלי להפסיד ימי עבודה. הידע הרב של ורים, הניסיון והליווי, משלב ההתעניינות ועד להשתלבות בעולם העבודה, הופכות אותו למקום האידאלי ללימודים.